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IDT Alt-R® CRISPR-Cas12a(Cpf1)基因编辑系统

当物种基因组富含A、T、DNA靶点无法使用Alt-R® CRISPR-Cas9基因编辑时,IDT提供的Alt-R® CRISPR-CAS12a系统可作为替代,使用时只需将crRNA与Cas12a蛋白简单混合即可形成RNP,而无需tracrRNA,IDT CRISPR-Cas12系统对CRISPR的使用范围进行了补充。


 

 

 

Alt-R® CRISPR-Cas12a实验流程

1、(用IDT工具)设计crRNA,使其Spacer与DNA靶序列互补,提交给IDT定制合成crRNA;
2、将crRNA与Cas12a蛋白混匀,形成RNP;
3、将RNP通过电转染等导入细胞或细胞核;
4、通过crRNA的Spacer识别DNA靶序列,通过Cas12a蛋白识别PAM序列,对DNA进行剪切;
5、对DNA断裂处进行修复
①进行非同源末端连接修复,实现基因敲除;
②(用IDT工具)设计供体DNA模板,进行同源重组修复,实现基因敲入、敲除、沉默等。







 

  

Alt-R® crRNA序列设计示意图


 

 

 

 

IDT CRISPR-Cas12a(Cpf1)产品

1、crRNA:定制合成的crRNA,包含20-24nt的特异性序列(定制)和20nt的通用序列,经化学修饰,具有核酸酶抗性。需要与Cas12a结合形成RNP复合体。

 

类型 产品名称 规格 包装
96孔板 384孔板
crRNA Alt-R® A.s. Cas12a crRNA 2 nmol
10 nmol
Alt-R® L.b. Cas12a crRNA 2 nmol
10 nmol


 


2、Cas12a核酸酶:包含核定位信号NLS,其中Alt-R® Cas12a Ultra核酸酶增强了对TTTT的PAM识别。

 

 

类型 产品名称 规格 货号
Cas12a (Cpf1) 核酸酶 Alt-R® A.s. Cas12a (Cpf1) Ultra 100 μg 10001272
500 μg 10001273
Alt-R® A.s. Cas12a (Cpf1) V3 100 μg 1081068
500 μg 1081069

 


 
3、Cas12a电转Enhancer:是Cas12a特异性的载体DNA,当使用原代细胞或难转染细胞时,可提高Lonza(原Amaxa)Nucleofector核转染系统等电穿孔设备的对RNP的转染效率,进而提高实验效率。

 

 

类型 产品名称 规格 货号
电穿孔Enhancer Alt-R® Cpf1 Electroporation Enhancer 2 nmol 1076300
10 nmol 1076301

 


 
4、Alt-R® HDR Enhancer:小分子化合物,可提高同源重组修复概率。在包括贴壁、悬浮的大量细胞系中均有活性,可用于Cas12a(Cpf1)核酸酶、Cas9核酸酶。

 

 

类型 产品名称 规格 货号
HDR Enhancer Alt-R® HDR Enhancer 100 µL 1081072
500 µL 1081073

 


5、Alt-R® HDR供体寡核苷酸:专门为同源重组修复基因敲入开发,具有比标准寡核苷酸更高的稳定性和更高的掺入率。

 

 

 


Cas12a和Cas9系统区别和应用

 

 

 

IDT Alt-R® CRISPR Alt-R® CRISPR-Cas12a(Cpf1)系统 Alt-R® CRISPR-Cas9系统
Alt-R® Cas12a V3核酸酶 Alt-R® Cas12a Ultra核酸酶 Alt-R® Cas9核酸酶 Alt-R® Cas9切口酶
特点 通用Cas12a酶,富含AT的物种,或使用CRISPR-Cas9有限制 经序列优化的Cas12a酶,比Cas12a通用型性能更佳 通用Cas9酶,易于使用且经济实惠 突变的Cas9酶,保留单链切割能力
PAM识别 TTTV TTTN NGG
DNA切割 双链 双链 单链
末端 5’突出 平末端 5’突出/3‘突出
建议用途 无法使用Cas9的基因编辑实验 需要高基因编辑效率的实验 一般基因编辑实验 适用于同时使用2种crRNA,各自识别并切割2条链中一条,通过将spacer由20nt提高到40nt,实现更高特异性
规格 100 μg或500 μg
Cas12a+crRNA crRNA 20-24nt特异性序列(推荐使用21nt),20nt通用序列 \
Cas9+gRNA crRNA \ 19-20nt特异性序列(推荐使用20nt),16nt通用序列
tracrRNA \ 67nt通用序列
Cas9+sgRNA sgRNA \ 19-20nt特异性序列(推荐使用20nt),80nt通用序列,经过序列修饰,不会引起细胞免疫反应,不会激活无关的基因


注:
N=任意碱基
V=A、C、G

 

更多Alt-R® CRISPR-Cas12a(Cpf1)基因编辑系统信息,欢迎来电咨询13521452266
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