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Attana Cell 200蛋白互作分析仪

——基于全细胞的生物大分子相互作用分析系统

 

瑞典Attana公司制造的Attana Cell 200蛋白互作分析仪,是一种无需标记、高灵敏度可直接在细胞表面测量分子相互作用的生物传感器,可测定蛋白与DNA、RNA、启动子、转录因子、肽段、抗体、多糖、酶、细菌、病毒、细胞、组织切片等各类生物大分子之间的相互作用,其填补了传统生物传感器与基于细胞的分析方法之间的空白,可用于亲和力、动力学、免疫原性、浓度定量、分子垂钓、生物类似药一致性评价等实验中。

 

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Attana蛋白互作分析仪依托的石英晶体微天平(Quartz Crystal Microbalance,简称QCM)技术,发展始于上世纪60年代初期,是一种非常灵敏的质量检测工具,其测量精度可达纳克级,比灵敏度在微克级的电子微天平高1000 倍,理论上可以测到的质量变化相当于单分子层或原子层的几分之一,其利用了石英晶体的压电效应,外加的交流电势使石英晶体在共振频率下震动,当分子流经晶体并与表面结合,振动频率会发生变化,其频率差异可以用来反映实时的分子相互作用。

 

自2010年上市以来,Attana Cell 200蛋白互作分析仪已广泛用于蛋白互作、蛋白细胞互作、抗体药研发等领域,赢得了包括大学、药企、CRO实验室的信任,与制药化工巨头Lonza集团、胰岛素研发明星诺和诺德等长期合作。

 

相比传统分子互作检测技术,Attana开创了直接在细胞层面进行实时原位分子结合动力学的检测方法,更准确地反映了体内环境的分子间互作,能够高质量、精确地研究其特异性、动力学和亲和力。

 

Attana Cell 200蛋白互作分析仪检测优势

1、可检测蛋白与细胞的相互作用
2、可检测蛋白与组织切片的相互作用
3、可检测细胞与细胞的相互作用
4、可使用粗制蛋白样品

 

Attana Cell 200蛋白互作分析仪实验操作流程举例(蛋白-细胞互作分析)

一、实验材料
1.PBS-Phosphate-buffered salt pH 7.4。
2.水——用于Attana Cell 200蛋白互作分析仪的所有水必须是高质量的水(18.2MΩ,0.2μm过滤)。
3.Attana Cell 200蛋白互作分析仪。
4.适当的阳性和阴性对照分析物。
5.适当的参考细胞系。

 

二、实验流程
2.1 贴壁细胞——铺细胞

2.2.1 细胞生长和观察
1.COP-1表面——细胞优化的聚苯乙烯表面。 Attana蛋白互作分析仪芯片。
2.培养基——用于特定细胞系的任何合适的细胞培养基。
3.胰蛋白酶-EDTA溶液。
4.贴壁细胞——可以在标准细胞培养物中生长的任何细胞系都可以在COP-1表面上生长。

2.2 悬浮细胞——捕获细胞
1.LNB-羧基表面——低非特异性结合羧基表面。 Attana蛋白互作分析仪芯片。
2.Amine coupling kit——EDC(1-乙基-3- [3-二甲基氨基丙基]——碳二亚胺盐酸盐),磺基-NHS(N-羟基磺基琥珀酰亚胺),乙醇胺(1M,pH8.5)。
3.固定化缓冲液——例如0.1M乙酸钠pH4.5。
4.捕获分子(如ConA等)——参见注释6.
5.悬浮细胞——任何不粘附于标准细胞培养物的原代细胞或细胞系。 该方法也适用于贴壁细胞。

2.3 固定细胞
1.甲醛-新鲜制备的3.7%无甲醇甲醛。

2.4 观察细胞
1.DAPI-40,6-二脒基-2-苯基吲哚,3μM。
2.荧光显微镜。
3.其他染色——见注10。

2.5 相互作用实验
1.待测样本。
2.10mM甘氨酸pH 3。
3.10mM甘氨酸pH 2。
4.10mM甘氨酸pH 1.5。
5.20mM甘氨酸pH 1.5。
6.含有1M NaCl的10mM甘氨酸pH 3。
7.含有3M NaCl的10mM甘氨酸pH3。
8.1mM NaOH。
9.10mM NaOH。
10.100mM NaOH。
11.含有3M NaCl的1mM NaOH。
12.含有3M NaCl的10mM NaOH。
13.含有3M NaCl的100mM NaOH。
14.0.005%SDS。
15.0.01%SDS。

 

三、实验方法
1.所有溶液必须采用优质水(18.2MΩcm,0.2μm过滤)制备。
2.当通过溶解固体(例如粉末或粉末)制备溶液时,必须使用0.2μm过滤器进行过滤(参见注1)。
3.应轻轻完成所有移液操作,同时避免移液器吸头与传感器表面接触。
4.传感器表面绝对不能干燥。 更换缓冲液或进行清洗时,务必留下少量液体,足以覆盖表面。
5.尽可能覆盖表面,以防止灰尘沉积在表面上。

3.1 贴壁细胞——铺细胞
1.按照使用说明准备COP-1芯片表面。
2.按照标准细胞传代方法获取细胞(参见注释2)。
3.在培养基中将细胞稀释至适当的细胞密度(见注3)。
4.向COP-1培养室中加入700μL细胞悬液。
5.轻轻地上下吹打悬浮液一次,以确保细胞均匀分布。
6.将传感器芯片置于适当的条件下,使细胞生长至少1个细胞周期(见注4)。

3.2 悬浮细胞——捕获细胞
1.将捕获分子溶解或稀释在合适的固定缓冲液中(见注5)。
2.将捕获分子固定在LNB-羧基表面上(见注6)。
3.将传感器表面(即金芯片)转移到COP-1支架上。
4.连接培养室。
5.准备最终密度为2×106细胞/ mL的细胞悬液(以PBS重悬)(见注7)。
6.移取50μL细胞悬浮液到捕获表面,确保其覆盖整个表面。
7.在室温下孵育细胞30分钟。

3.3 固定细胞(可选,见注释8)
1.从培养室中弃去细胞培养基或缓冲液。
2.用PBS轻轻吹打冲洗细胞两次。
3.在室温下用PBS洗涤细胞两次,每次5分钟。
4.在室温下用不含甲醇的甲醛3.7%固定细胞10分钟(见注9)。
5.用PBS轻轻吹打两次。
6.在室温下用PBS洗涤细胞两次,每次5分钟。
7.向培养室中加入700μL PBS。芯片可以在4℃下储存数天。

3.4 观察芯片表面的细胞
在此阶段,可以使用荧光显微镜评估表面覆盖率。
1.在室温下用3μM DAPI孵育细胞5分钟(见注10)。
2.弃去DAPI。
3.用PBS轻轻吹打冲洗细胞三次。
4.去除大部分液体,只留下足以覆盖表面的液体。
5.取下培养室。
6.在荧光显微镜下观察以评估细胞密度(见注11)(图2)。
7.安装测量盖。
8.使用移液器,通过将移液管尖端“插入”两个流动池孔中的一个,用流动缓冲液轻轻地填充流动池(见注12)。此时芯片表面已准备好用于上机,但可以在4℃下在湿度室中储存数天。

在荧光显微镜下观察以评估细胞密度
 

3.5 互做实验
双通道系统可用于评价和减去与传感器表面的非特异性结合。不表达特异性受体的细胞可用作对照。强烈建议使用对照来分析与芯片表面和除靶点之外的细胞膜组分的非特异性相互作用(见注释13)。 还建议在分析物注射循环之前和之后(即,在数据收集之前和数据收集之后,而不是在每个循环之间)使用阳性和阴性对照样品注射。

1.用Running Buffer运行仪器,使液体充满管路(参见注释14)。
2.将芯片插入Attana蛋白互作分析仪。
3.将流速设置为20μL/ min,启动。
4.将温度设置为所需的值。
5.使基线稳定(即基线漂移小于0.2 Hz / min,持续10分钟)。这通常需要至少4小时,最多可能需要24小时。
6.以下述方法确定待测样品的浓度:从0.1 KD(如果KD已知)或5μg/ mL(如果KD未知)开始注入分析物,并且每次进样浓度增大2倍,直到检测不到显著的信号增加。用此方法测定的分析物浓度范围,其通常接近0.1KD至10KD的范围。
7.准备再生溶液(见注15)。
8.按步骤6将样品注入最大浓度的一半。
9.如果之前做过实验,请从最可能的再生解决方案开始。否则,请从注释15中列表中的第一个解决方案开始。
10.以短脉冲式注入再生溶液(酸性溶液30秒,碱性溶液或洗涤剂10秒)。如果除去分析物不完全(即信号部分返回基线),则增加再生时间(见注释16)。如果分析物没有或只有极少量的被去除,请进入列表中的下一个再生溶液。
11.按步骤6将样品注入最大浓度的一半。
12.每次步骤10之后要再生表面。
13.重复步骤11和12共计五次。最后3个循环必须显示相同的结合水平(见注17)(图4)。

重复步骤11和12共计五次。最后3个循环必须显示相同的结合水平

14.确定适当的因子稀释度,以跨越步骤6的分析物浓度范围,同时具有五种不同的浓度。
15.用稀释分析物,按步骤14准备分析物稀释行。包括相同数量的空白注射(见注18)。
16.用Running Buffer清洗蛋白互作分析仪环。
17.注入随机空白,结合时间为105秒,解离时间为300秒(对于强结合物,解离时间可能更长)。
18.按步骤16注入相应的样品。
19.每步骤6重新再生。
20.用Running Buffer清洗蛋白互作分析仪环路。
21.重复步骤17-20,直到分析完所有样品。
22.现在可以使用Attester Evaluation(Attana)和/或TraceDrawer(Ridgeview)分析数据(图5)。

用Attester Evaluation(Attana)和/或TraceDrawer(Ridgeview)分析数据

 

4.注释
1.如果不能用0.2μm过滤器过滤溶液。在这种情况下,使用0.45μm过滤器进行过滤也行,但是有可能增加堵塞仪器管道的风险。
2.使用贴壁细胞之前,建议至少将细胞传代两次。使用标准方法(例如,胰蛋白酶-EDTA处理)消化收集细胞。
3.标准细胞密度为60,000-120,000个细胞/ mL。通常,建议使用较高的细胞密度,只要细胞均匀分布在溶液中即可。调节细胞密度的目的是确保细胞覆盖率为80%以实现高灵敏度,同时防止细胞多层叠在一起。
4.细胞必须贴壁牢固。芯片上加入细胞后可以在培养箱培养过夜,细胞融合度不应超过80%。
5.合适的固定缓冲液应该具有较强的缓冲力并且pH值比待固定分子的pI低1。此外,它不应该破坏或导致待固定分子的不可逆构象变化。
6.使用胺偶联试剂盒时,仔细按照说明书操作,在LNB-羧基表面上实现捕获分子的高密度或饱和覆盖。可以多次注射捕获分子,直至达到饱和。好的捕获分子应该能与细胞表面分子强结合。其他标准是捕获分子在测定期间应该是稳定的并且不与分析物相互作用。常见的选择包括抗体和凝集素。
7.可以使用多种缓冲液进行细胞稀释,只要它不含有抑制捕获分子与其靶标之间相互作用的成分即可。
8.细胞固定有利有弊。优点是固定的细胞更稳定,能进行更长时间的实验并有更好的信噪比。缺点包括改变活性位点的风险。为了尽量减少这种缺点,必须注意尽可能温和的固定细胞,如注释[10]所述。
9.在室温下用3.7%甲醛固定10分钟是一个很好的开始。如果需要更温和的固定剂,降低甲醛浓度或使用冷甲醛在冰上或4℃下进行固定。也可以使用其他交联剂,例如戊二醛。
10.可以使用任何核酸染色剂。也可以使用表面染色,但建议在测定前除去染色剂或确认染色剂不会影响细胞表面和目标分子之间的相互作用。
11.80%的细胞融合度是一个很好的目标。融合度降低会降低灵敏度。
12.填充细胞小室时,确保没有气泡,这会减少基线稳定需要的时间。用Running Buffer轻轻地冲洗流动池,可以去除气泡。如果没有清除气泡,可能需要拆下并重新安装检测盖。
13.选择与实验组尽可能接近的对照。对照的优先顺序是(1)具有变体无活性靶标的相同细胞系(例如,突变体),(2)不存在靶分子的相同细胞系(例如,敲低),(3)其他完全不同的不表达靶分子的细胞系或没有任何细胞的芯片。
14.Attana蛋白互作分析仪可以使用各种Running Buffer。它可以是简单的缓冲液,如PBST或HBST,或更多含有蛋白质含量的粗缓冲液,如血清或培养基。运行缓冲区还可以包含阻断剂,如BSA或酪蛋白。
15.在随后的分析周期开始之前,执行表面再生以去除剩余的分析物。再生过程必须结合细胞及其表位的有效性和保存。找到满足这些标准的再生解决方案必须根据经验对每种类型的交互对进行。然而,通常可以在使用相似分子种类的实验中找到指导。要优化再生条件,请从温和的再生溶液开始。如果没有去除分析物,则需要尝试更严格的解决方案。以下再生条件可用作细胞传感器表面的指导:10 mM甘氨酸pH 3-20 mM甘氨酸pH 1.5,10 mM甘氨酸pH 3-20 mM甘氨酸pH 1.5含1-3 M NaCl,1 mM至100 mM NaOH,1mM至100mM NaOH,3M NaCl,0.005%至0.01%SDS。
16.通过以20 s增量(最多50 s)和/或重复进样增加脉冲长度,可以增加接触时间。不要将接触时间增加到100秒以上。
17.在样品再生注射的前几个循环期间,灵敏度初始降低是很常见的。最后三次注射的结合水平必须相似。如果连续进样的响应差异减小,但尚未达到0,则重复小标题3.5,步骤11和步骤12,直到进样足够稳定或副标题3.5,步骤11和步骤12重复总共十次。
18.用Running Buffer做空白对照(样品也用Running Buffer稀释)。
 

Attana蛋白互作分析仪应用

实例1、检测蛋白药物与肿瘤组织切片的亲和动力学

长久以来,将癌症组织用甲醛固定石蜡包埋(FFPE)后做组织切片,进行免疫组化(IHC)分析,是癌症相关抗原的标准检测方法。但免疫组化本身很难定量抗体与癌症相关抗原结合的特异性和亲和力。Clausen等人建立了一套以Attana Cell 200 QCM技术为核心,直接在组织切片上进行实时原位分子结合动力学的检测方法。

 

研究者直接在FFPE人胎盘组织、乳腺癌和前列腺肿瘤标本中,测定了rVAR2蛋白与它的胎盘样硫酸软骨素(pl-CS)受体之间的相互作用,发现rVAR2与FFPE人胎盘、肿瘤组织存在纳摩尔级的亲和力,与pl-CS阴性的正常组织无相互作用。

 

进一步用雄激素受体N-20的抗体(抗AR)对此方法进行评估,发现Attana得出的KD值与可用抗原表位的数量无关,表明Attana不仅能在组织标本上直接对抗原-抗体结合亲和力进行定量,还能评估抗体所能识别的抗原表位的数量。

 

基于这些结果,研究者认为Attana QCM技术不仅可用于挑选诊断和治疗中的最佳生物制剂,还能用于开发新型高亲和力的药物。(Clausen, T. M., et al. Real-time and label free determination of ligand binding-kinetics to primary cancer tissue specimens; a novel tool for the assessment of biomarker targeting. Sens Biosensing Res. 2016; 9: 23-30.)

Attana Cell 200蛋白互作分析仪中国授权代理
图1.Attana Cell 200蛋白互作分析仪与COP-1检测芯片。

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图2.免疫组化鉴定为阳性的甲醛固定石蜡包埋组织样品被切成5μm厚的薄片,并固定在COP-1芯片中心。 

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图3.(b)Attana测定出rVAR2蛋白与胎盘组织的KD值为4.27nM,具有高亲和力。(c)当添加了能抑制rVAR2粘附于胎盘组织的CSA溶液后,rVAR2蛋白与胎盘组织的结合曲线不再有明显的结合点和解离点。

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图4.(a)免疫组化结果显示,与作为正常组织对照的扁桃体组织切片相比,rVAR2蛋白与乳腺癌、前列腺肿瘤组织切片有强相互作用,进一步用Attana测定其KD值分别为8.9nM和6.65nM,而与扁桃体组织的结合曲线无明显的结合点和解离点,无法测出其KD值。(b和c)用V5-FITC的抗体对rVAR2蛋白进行定位,进一步验证了Attana得到的结果,即rVAR2蛋白与前列腺肿瘤组织切片强结合,而不与扁桃体组织结合。证明Attana能准确对组织切片上抗原-抗体的亲和力进行定性和定量。

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图5.检测发现纯化的胎盘样硫酸软骨素(pl-CS)受体与rVAR2蛋白的KD值为3.6nM,具有强结合,证明Attana可准确检测纯化蛋白间的相互作用。

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图6.将乳腺癌细胞(SKBR3)、前列腺癌细胞(LNCap)与中国仓鼠卵巢细胞(CHO)相比,免疫组化和Attana的结果一致,乳腺癌细胞与前列腺癌细胞均检测到细胞与rVAR2蛋白有着很强的亲和力。

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图7.高表达AR的Lncap细胞与AR抗体有强的亲和力,而雄激素非依赖的PC3与AR抗体的亲和力相对较弱。这一结果进一步在细胞水平上证明了Attana具有广泛的兼容性。

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图8.采用Attana对AR抗体与FFPE组织切片的亲和力检测结果,与免疫组化结果一致,即免疫组化阳性的FFPE前列腺癌组织,对AR抗体有强的亲和力,免疫组化阴性的FFPE胎盘组织,对AR抗体无相互作用。这一结果在组织切片水平上也证明了Attana能有效监测抗体与切片的结合。

 

实验操作总结:
①组织切片如何固定在COP-1芯片上?

Attana的COP-1芯片在室温用聚L-赖氨酸溶液包被5分钟。包被后,用PBST冲洗芯片,并在室温干燥2小时。将甲醛固定石蜡包埋(FFPE)组织样品切成5μm厚的薄片,并贴在芯片上,60℃烘烤1h。

②脱蜡和抗原修复
将COP-1芯片上的组织样品浸没在EZprep溶液中,65℃水浴30min进行脱蜡。之后PBS洗3次。再在95℃下,用pH6.0的10mM柠檬酸钠、0.05%吐温溶液浸泡30min进行抗原修复。

 

 

实例2、研究抗体药曲妥珠单抗与SKOV3细胞的亲和力

在抗体药物研发中,检测抗体与细胞的结合非常重要。使用石英晶体微天平(Quartz Crystal Microbalance,简称QCM),研究单克隆抗体曲妥珠单抗与表达人表皮生长因子受体2(HER2)的卵巢腺癌上皮细胞(SKOV3)的亲和,是一项非常新颖的技术。

 

Elmlund等人的实验结果揭示出曲妥珠单抗与SKOV3细胞结合的平均解离常数KD值为7±1nM。实验过程中对细胞固定程序和接种密度等进行优化非常重要,为抗体药的亲和力研究提供了一种新方法。与纯化的抗原抗体的结合相比,抗体与靶细胞的结合更为自然。

 

这些结果证明了在药物开发中使用基于全细胞的QCM分析,用于筛选靶向HER2的候选药物的潜力。(Elmlund, L., et al. Study of the interaction of trastuzumab and skov3 epithelial cancer cells using a quartz crystal microbalance sensor. Sensors, 2015; 15(3): 5884–5894)


Attana Cell 200蛋白互作分析仪研究曲妥珠单抗与SKOV3细胞的结合
图1.赫赛汀抗体与SKOV3细胞表面HER2受体(蓝色)结合的示意图。将SKOV3细胞培养并固定在Attana Cell 200蛋白互作分析仪的COP-1检测芯片上,然后在其上注射赫赛汀,观察振动频率的变化,实时测定赫赛汀与细胞膜上的HER2亲和力。

Attana Cell 200蛋白互作分析仪研究曲妥珠单抗与SKOV3细胞的结合 
图2.用不同浓度的甲醛(FA)和戊二醛(GA)对COP-1芯片上SKOV3细胞进行固定后,采取DAPI染色。荧光显微镜观察发现,随甲醛(FA)浓度的升高,固定在芯片上的细胞也越多;而随戊二醛(GA)浓度的升高,固定在芯片上的细胞的数量不变或者稍有减少。后续实验选择3.7% FA和0.5% GA对芯片上的细胞进行固定。

Attana Cell 200蛋白互作分析仪研究曲妥珠单抗与SKOV3细胞的结合 
图3.采用3.7%甲醛(FA)固定芯片上SKOV3细胞,注射20μg/mL赫赛汀后,Attana蛋白互作分析仪绘制出了一条结合点和解离点均很明显的结合曲线。

Attana Cell 200蛋白互作分析仪研究曲妥珠单抗与SKOV3细胞的结合 
图4.采用0.5% GA戊二醛(GA)的固定方法时,虽然频率改变很大(达到17Hz左右),但是在解离阶段,曲线迅速下降、很快回复到基线类似水平,这一结果代表此时的结合很弱或发生了非特异性结合。因此,0.5% GA戊二醛(GA)固定对本次实验不合适。

Attana Cell 200蛋白互作分析仪研究曲妥珠单抗与SKOV3细胞的结合
图5.对比不同浓度的FA固定,2%浓度固定时,最大反应频率随抗体浓度增加并没有增加,因此有可能是芯片的非特异性结合。而5%浓度固定时,最大反应频率虽然与抗体浓度基本成比例增加,但是波动较大。在结合5%浓度固定时,染色较亮,这时很可能也发生了非特异性结合。因此后续实验选择3.7%FA固定。

Attana Cell 200蛋白互作分析仪研究曲妥珠单抗与SKOV3细胞的结合
图6.优化细胞接种密度(接种2万、4万、8万细胞),再DAPI染色,荧光显微镜观察发现在8×104的细胞接种密度下,不仅能制出一条结合点和解离点均很明显的结合曲线、20μg/mL的赫赛汀不会使其饱和,并且解离常数的平均值为KD=7±1nM,此结果与其他基于全细胞水平的分析得出的结果(KD=5nM)相一致。


在药物开发的早期研究和对生物分子间识别的基础性研究中,通常采用的是以纯化受体或细胞裂解物为基础的体外分析方法。这类方法不仅费时、成本高、抗体需要标记而且灵敏度也较低。生物大分子在标记后会影响分子之间的相互作用特性,并且增加非特异结合。而传统的生物传感器需要将纯化后的靶标分子固定在传感器表面,这些脱离了生理条件的靶标分子可能会发生构象上的改变,使得实验结果不能真实反映生理条件下分子间的相互作用。

 

Attana Cell 200蛋白互作分析仪采用石英晶体微量天平(QCM)技术,能快速、无需标记、直接在细胞表面准确地定性和定量测量分子间的相互作用,是基于全细胞的互作分析的研究利器。

 

 

实例3、用于多克隆抗体的动力学和亲和力的检测和计算

抗体生产的主要目标是获得用于实验、诊断测试或治疗的高滴度、高亲和力抗血清。检测和监测这些多克隆抗体的纯化耗时且麻烦。本实验实例表明,Attana蛋白互作分析仪,可快速鉴定分别针对多肽、蛋白质抗原产生的多克隆抗体。多克隆抗体本质上是抗体的混合物,具有各自的动力学特征,并且很可能还具有抗原表位特异性的差异。由于这种异质性,导出的速率常数和计算的亲和力应被视为不同亚群的平均值。

 

实验目的
确定两种不同的多克隆抗体与其各自的多肽和蛋白抗原之间相互作用的动力学。


实验方法
1、多克隆抗体和生物素化肽抗原之间相互作用的动力学测定

生物素化肽(1纳克/毫升)以25微升/分钟的流速,用PBST(含0.005%吐温20的10mM磷酸盐缓冲液)作为流动缓冲液,固定在链霉亲和素包被的Attana生物素芯片上。将识别生物素化肽抗原的纯化多克隆抗体稀释至10、5、2.5、1.25 微克/毫升。随后注射到芯片表面上。在每次抗体注射之间,通过一次注射甘氨酸-盐酸(pH 2.5)使表面再生,接触时间为30秒。

attana蛋白互作分析仪 北京泽平

2、多克隆抗体和15kDa蛋白质抗原之间相互作用的动力学测定
在Attana蛋白互作分析仪中平衡Attana羧基传感器芯片,通过EDC/sulfo-NHS介导的胺偶联,使用10mM HEPES作为23℃和25微升/分钟的运行缓冲液,将50微升蛋白质抗原(0.1μg/ml,溶于HAc pH 5.0中)固定在表面上。用PBST做流动相,以5、2.5、1.25、0.625和0.3125μg/ml注射多克隆抗体进行相互作用实验。表面顺序用100mM H3PO4再生45秒、200mM氢氧化钠再生30秒。在每个浓度系列之前和之后注射缓冲液,并用作参考空白。

 

数据由Attester3.0版收集,随后在Attester Evaluation3.0版中进行处理。使用Attester Evaluation3.0版和Clamp XP获得动力学数据。对于速率常数计算,使用150kDa作为多克隆抗体的分子量。


实验结果
两种不同的多克隆抗体血清(一种针对肽,另一种针对蛋白质),及其抗原之间的相互作用所获得的数据如图1和图2所示。所用多克隆抗体的最高浓度为10和5微克/毫升,产生的频率响应分别为12和20赫兹。为了控制相互作用不受传质限制的影响,测试了几种流速,发现25升/分钟适用于相互作用研究。

 

在统计了所有数据,结合曲线的全局动力学分析,使用Clamp XP软件,计算出针对肽抗原的多克隆抗体的KD为7.2nM(图1),针对蛋白质抗原的多克隆抗体的KD为0.3nM(图2)。

 

attana蛋白互作分析仪 北京泽平

图1:多克隆抗体与生物素化肽抗原的结合。(A)结合曲线(黑色)、结合与简单的1:1结合模型的拟合(红色)。(B)实验设置的示意图。(C)导出的速率常数和由koff /kon计算的KD 。

 

attana蛋白互作分析仪 北京泽平

图2:多克隆抗体与胺偶联蛋白抗原的结合。(A)结合曲线(黑色)、结合与简单的1:1结合模型的拟合(红色)。(B)实验设置的示意图。(C)导出的速率常数和由koff /kon计算的KD 。


如上所述,多克隆抗体样品的异质性,很可能导致不同的亲和力。这也提示将简单的动力学相互作用模型与数据相匹配的可能性。图1中的A图,显示在解离阶段的第一部分有相当高的解离速度,表明亚群与抗原形成相对不稳定的复合物。此后,解离速率稳定下来,代表与抗原形成相对稳定复合物的亚群,并且从这部分解离阶段获得的数据显示与1:1相互作用模型有更好的一致性。


此外,如果使用传感器表面固定抗原的方式进行实验,为了表征二价或多价抗体,必须非常小心地测量亲和力而不要测结合总亲和力。我们以前的数据显示,使用Attana羧基或生物素传感器芯片,可以非常精确地滴定表面抗原密度,以避免由高表面密度引起的总亲和力效应。这是在上述实验开始之前对两种抗原进行的。


实验结论
1、本实验使用Attana A100 C-Fast系统,开发了一种方法,可以实时、无标记地测量多克隆抗体与多肽和蛋白质抗原的相互作用。
2、通过使用该方法,可以导出相互作用的动力学信息,例如结合(kon)和解离(koff)速率常数,并计算相互作用的亲和力。
3、该方法可用于监控多克隆抗体的纯化效率、比较不同免疫的效果、监测滴度变化等。
4、该实验可针对固定的抗原筛选多克隆抗体,节省时间且成本低。

 

 

实例4、无需纯化抗体,直接对杂交瘤上清液进行筛选和鉴定

在鉴定抗体-抗原相互作用之前纯化抗体、标记抗体,通常非常耗时,并且存在需要优化实验条件和产量低等问题。瑞典Attana蛋白互作分析仪和Attana抗体捕获试剂盒可以减少这些问题。在这里,展示了Attana的一种抗小鼠抗体的芯片,它能够从原材料中捕获抗体,随后详细研究了抗体与其抗原之间相互作用的动力学。


Attana蛋白互作分析仪,利用石英晶体微天平(QCM)技术,对分子相互作用进行实时、无标记测量。当分子被添加到传感器表面或从传感器表面移除时,共振频率的变化对应于表面质量的变化。通过将目标分子固定到传感器表面,并使相互作用的分子在表面上流动,可以实时研究相互作用。实时信息可以提供关于相互作用的动力学、亲和力和特异性数据。


实验目标
首先,从粗样品(如杂交瘤上清液)中筛选小鼠IgG抗体,确定结合抗原的解离速率。然后,确定在筛选中选择的抗原和抗体之间的详细动力学速率常数和亲和力。


实验方法
按照小鼠免疫球蛋白捕获试剂盒中提供的说明,以1xHBST(10mM HEPES缓冲盐,0.005%吐温20,25微升/分钟,22℃)为流动相,将小鼠免疫球蛋白捕获分子固定在Attana羧基传感器芯片表面,然后从杂交瘤上清液中捕获小鼠IgG抗体,然后实时研究它们各自与抗原的相互作用特性。使用5微克/毫升的抗原浓度来确定解离速率常数,使用1.25至20微克/毫升的浓度来进行详细的动力学表征。在每个相互作用循环后,表面被再生,恢复最初的小鼠IgG捕获能力。

 

使用Attester3.1软件收集数据,然后在Attester Evaluation3.1中进行处理。Attester Evaluation软件中嵌入的解离速率筛选工具用于识别抗原解离速率常数最低的抗体。使用Attester Evaluation和Clamp XP软件计算和获得详细的动力学数据。

attana蛋白互作分析仪 北京泽平

 

实验结果
针对一种抗原,从产生小鼠IgG的杂交瘤培养物中筛选了11种抗体的解离速率常数。首先,使用小鼠IgG结合分子从各自的上清液中捕获IgG。此后,将抗原注射到表面上,并监测与捕获的抗体的相互作用。使用Attester Evaluation软件的解离速率筛选工具用于生成一个列表,突出显示最稳定的相互作用(低解离速率常数)。参见图1的结果图和收集的数据。

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图1、11种不同抗体的抗原相互作用曲线汇总。对于每个相互作用周期,首先注射一个含有特定抗体的杂交瘤上清液以捕获抗体,随后注射抗原。图中还显示了Attester Evaluation软件的解离速率筛选工具。该表给出了11个确定的解离常数。阈值功能可以用于突出显示解离速率常数低于某个值的抗体。如图所示,低于1.8 x 10-4的解离速率常数以蓝色突出显示 。

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选择具有最低解离速率的杂交瘤,用于进一步抗体-抗原相互作用的详细动力学分析。在该步骤中,使用了与解离速率筛选相同的芯片。在保持抗体捕获水平恒定的同时,改变抗原浓度,通过使用全局曲线拟合算法分析数据来得到详细的动力学速率常数(即相互作用的kon、koff和KD,图2)

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图2、(A)动力学速率常数kon 和koff的测定。相互作用数据用黑色表示,动力学模型的拟合用红色表示。(B)捕获分析实验设置的示意图。(C)速率常数。


实验结论
1、利用Attana蛋白互作分析仪,开发了一种实时、无标记的从杂交瘤上清液中捕获小鼠抗体的方法。同样的方法可以用于捕获人类免疫球蛋白。
2、导出相互作用、结合(Kon)和解离(Koff)速率常数的动力学信息,可以计算分子之间的亲和力(KD)。
3、实现了直接从粗样品(如杂交瘤上清液)中快速筛选多达192个抗体-抗原对,而无需纯化或标记抗体。
4、该方法使用通用的固定和再生条件,并且不需要预先纯化抗体,可以显著节省时间、提高效率。
 

 

应用Attana Cell 200蛋白互作分析仪的参考文献

1.The mechanism of Hsp90-induced oligomerizaton of Tau. Weickert S, Wawrzyniuk M, John LH, Rüdiger SGD, Drescher M. Science Advances, Mar 13;6(11).2020
2.The TLR9 Agonist Cobitolimod Induces IL10-Producing Wound Healing Macrophages and Regulatory T Cells in Ulcerative Colitis. Heike Schmitt, Julia Ulmschneider, Ulrike Billmeier, Michael Vieth, Patrizio Scarozza, Sophia Sonnewald, Stephen Reid, Imke Atreya, Timo Rath, Sebastian Zundler, Melanie Langheinrich, Jürgen Schüttler, Arndt Hartmann, Thomas Winkler, Charlotte Admyre, Thomas Knittel, Christine Dieterich Johansson, Arezou Zargari, Markus F Neurath, Raja Atreya. Journal of Crohn's and Colitis, 1-17, 2019
3.Recombinant spider silk coatings functionalized with enzymes targeting bacteria and biofilms. Fredrik Seijsing. Linnea Nilebäck. Oskar Öhman. Rajeev Pasupuleti. Camilla Ståhl, Johan Seijsing, My Hedhammar. Microbiology Open, December 2019
4.Electro-Responsive Suce Composition and Kinetics of an Ionic Liquid in a Polar Oil. Nicklas Hjalmarsson, Erik Bergendal, Yong-Lei Wang, Bulat Munavirov, Daniel Wallinder, Sergei Glavatskih, Teodor Aastrup, Rob Atkin, István Furó, Mark W. Rutland. Langmuir, 2019, 35, 48, 15692-15700
5.Monovalent TNF receptor 1-selective antibody with improved affinity and neutralizing activity. Fabian Richter, Oliver Seifert, Andreas Herrmann, Klaus Pfizenmaier, Roland E. Kontermann. mAbs, 11 (1), 2019, p. 166-177
6.Dectin-1 Binding to Annexins on Apoptotic Cells Induces Peripheral Immune Tolerance via NADPH Oxidase-2. Kevin Bode et al.. Cell Rep, Dec 24;29(13):4435-4446.2019
7.Phenotypic Screen with the Human Secretome Identifies FGF16 as Inducing Proliferation of iPSC-Derived Cardiac Progenitor Cells. Karin Jennbacken, Fredrik Wågberg, Ulla Karlsson et al.. International Journal of Molecular Sciences 06.12.19
8.Rapid affinity chromatographic isolation method for LDL in human plasma by immobilized chondroitin-6-sulfate and anti-apoB-100 antibody monolithic disks in tandem. Thana Liangsupree, Evgen Multia, Jari Metso, Matti Jauhiainen, Patrik Forssén, Torgny Fornstedt, Katariina Öörni, Aleš Podgornik & Marja-Liisa Riekkola. Scientific Reportsvolume 9, Article number: 11235 (2019)
9.Defining the structural basis for human alloantibody binding to human leukocyte antigen allele HLA-A*11:01. Yue Gu, Yee Hwa Wong, Chong Wai Liew et al.. Nature Communications, 10 (893), 2019
10.Improved monovalent TNF receptor 1-selective inhibitor with novel heterodimerizing Fc. Fabian Richter, Oliver Seifert, Andreas Herrmann, Klaus Pfizenmaier, Roland E. Kontermann. mAbs, 31 of March 2019
11.Anti-LRP5/6 VHHs promote differentiation of Wnt-hypersensitive intestinal stem cells. Nicola Fenderito, David Proverbio et al.. Nature Communications, 10 (365).2019
12.Monovalent TNF receptor 1-selective antibody with improved affinity and neutralizing activity. Fabian Richter, Oliver Seifert, Andreas Herrmann, Klaus Pfizenmaier, Roland E. Kontermann. mAbs, 11 (1), 2019, p. 166-177
13.Generation by phage display and characterization of drug-target complex-specific antibodies for pharmacokinetic analysis of biotherapeutics. Harth S, Ten Haaf A, Loew C, Frisch C, Knappik A. MAbs. 2019 Jan;11(1):178-190.
14.A Single-Chain-Based Hexavalent CD27 Agonist Enhances T Cell Activation and Induces Anti-Tumor Immunity. Thiemann M et al.. Front Oncol. 2018 Sep 19;8:387.
15.Fabrication of Carbohydrate Chips Based on Polydopamine for Real-Time Determination of Carbohydrate–Lectin Interactions by QCM Biosensor. Kun Sang et al.. Polymers 2018, 10(11), 1275
16.Differential recognition of Haemophilus influenzae whole bacterial cells and isolated lipooligosaccharides by galactosespecific lectins. Ioanna Kalograiaki, Begoña Euba, María del Carmen et al.. Nature, Scientific Reports 8, 16292 (2018)
17.Selective Sensing of the Biotinyl Moiety Using Molecularly Imprinted Polyaniline Nanowires. S. Mandal, S. Suriyanarayanan, I. A. Nicholls & K.Ramanujam. J. Electrochem. Soc. 2018 volume 165, issue 14,
18.Effects of the flow type on the immobilization of horseradish peroxidase on polymers. Spaska Yaneva, Tzvetan Velinov, Lyubov Yotova.. Journal of Chemical Technology and Metallurgy, vol. 53 (5), 2018, p. 791-800.
19.Label-Free Cell-Based Assay for Characterization of Biomolecules and Receptors. Diluka Peiris, Lars M. Jørgensen et al.. Epitopte Mapping Protocols, 2018, p. 53-63
20.Bacterial Suce Glycans: Microarray and QCM Strategies for Glycophenotyping and Exploration of Recognition by Host Receptors.. I. Kalograiaki, M Campanero-Rhodes, D. Proverbio, B. Euba, J. Garmendia, T. Aastrup et al.. Methods in Enzymology, vol. 598, 2018, p. 37-70
21.Off-target testing assays. Samuel Altun & Teodor Aastrup.. Scientistlive, 23rd January 2018.
22.Reliable Strategy for Analysis of Complex Biosensor Data. P. Forssén, J. Samuelsson, T. Aastrup, S. Altun, D. Wallinder, L. Wallbing, T. Fornstedt et al.. Analytical Chemistry, vol. 90 (8), 2018, p. 5366-5374.
23.Label-free in-flow detection of receptor recognition motifs on the biomolecular corona of nanoparticles. M. Gianneli, E. Polo, H. Lopez, V. Castagnola, T. Aastrup & K.A. Dawson.. Nanoscale, vol. 10, 2018, p. 5474-5481.
24.Virus-like particle display of HER2 induces potent anti-cancer responses. Arianna Palladini, Susan Thrane, Jessica Pihl, Adam F. Sander et al.. OncoImmunology, vol 7 (3), 2018,
25.Electrochemically synthesized molecularly imprinted polythiophene nanostructures as recognition elements for an aspirin-chemosensor. Subramanian Suriyanarayanana, Ian A. Nicholls et al.. Sensors and Actuators B: Chemical. Volume 253, December 2017, Pages 428-436
26.Synthesis and binding affinity analysis (..) using quartz crystal microbalance sensors. Oscar Norberg, Bin Wu, Olof Ramström et al.. Carbohydrate Research, vol. 452, 2017, p. 35-42.
27.QCM Biosensor Based on Polydopamine Suce for Real-Time Analysis of the Binding Kinetics of Protein-Protein Interactions. Chunli Wu, Xueming Li,Siyu Song et al.. Polymers, vol. 9(10), 2017, p. 482.
28.Optimization of 3D Suces of Dextran with Different Molecule Weights for Real-Time Detection of Biomolecular Interactions by a QCM Biosensor. Siyu Song, Yuchao Lu, Xueming Li et al.. Polymers, vol. 10(10), 2017, p. 409.
29.Novel QCM based method to predict the in-vivo behaviour of nanoparticles. M. Gianneli Y. Yan, E. Polo, D. Peiris et al.. Procedia Technology, vol. 27, 2017, p. 197-200.
30.Novel strategies to mimic transmembrane tumour necrosis factor-dependent activation of tumour necrosis factor receptor 2. Roman Fischer, Jessica Marsal, Cristiano Guttà, Roland E. Kontermann et al.. Scientific Reports, vol. 7, article 6607, 2017.
31.Inhibition of HER3 activation and tumour growth with a human antibody binding to a consered epitope formed by domain III and IV. Lisa C. Schmitt, Alexander Rau, Oliver Seifert, Jonas Honer, Roland E. Kontermann et al.. mAbs, vol. 9, 2017, p. 831-843.
32.Temperature effect on the complex formation between Plluronic acid F127 and starch. Yana Petkova-Olsson, Samuel Altun, Henrik Ullsten, Lars Janstrom. Carbohydrate Polymers, vol. 166, p. 264-270, 2017.
33.Cellular glycosylation affects Herceptin binding and sensitivity of breast cancer cells to doxorubicin and growth factors. Diluka Peiris, Alexander F. Spector, Hazel Welch, Miriam V. Dwek et al.. Scientific Reports, vol. 7, article 43006, 2017.
34.Selection of a monoclonal antibody by ELISA, immunoblotting and Quartz Crystal Microbalance technology for immunohistochemical detection of Mycoplasma mycoides subsp. mycoide. Luciani M, Armillotta G, Manna L, Ciarelli A, Di Febo T, Krasteva I, Pini A, Sacchini F, D'Angelo AR. Vet Ital. 2016 Jul 15.
35.Fluorescent Image–Guided Surgery with an Anti-Prostate Stem Cell Antigen (PSCA) Diabody Enables Targeted Resection of Mouse Prostate Cancer Xenografts in Real Time. Geoffrey A. Sonn, Andrew S. Behesnilian, Ziyue Karen Jiang, et al.. Clinical Cancer Research, vol. 22 (6), 2016, p.
36.Spatially Well-Defined Carbohydrate Nanoplatforms: Synthesis, Characterization and Lectin Interaction Study. B.J.J. Timmer D. Proverbio, S. Altun, O. Ramström, T. Aastrup, S.P. Vincent et al.. Chem. Commun., vol. 52, p. 12326-12329, 2016.
37.Signal enhancement in ligand-receptor interactions using dynamicpolymers at quartz crystal microblance sensors. Gunnar Dunér, Henrik Anderson, Zhichao Pei, Bjorn Ingemarsson et al.. Analyst, vol. 141, p. 3993-3996, 2016.
38.Combined Bacteria Microarray and Quartz Crystal Microbalance Approach for Exploring Glycosignatures…. Ioanna Kalograiaki, Begoña Euba, Davide Proverbio et al.. Anal. Chem, vol. 88 (11), p. 5950–5957, 2016.
39.Real-time and label free determination of ligand binding-kinetics to primary cancer tissue specimens…. Thomas Mandel Clausena, Marina Ayres Pereiraa et al.. Sensing & Bio-Sensing Research vol. 9, p. 23-30, 2016.
40.Glyconanomaterials for biosensing applications. Nanjing Hao, Kitjanit Neranon, Olof Ramström, Mingdi Yan. Biosensors and Bioelectronics, vol. 76, p. 113-130, 2016.
41.Facile fabrication of glycopolymer-based iron oxide nanoparticles and their applications…. Chen Shao, Xumig Le, Zhichao Pei, Li,a Zhichao Pei et al.. Polym. Chem., vol. 7, p. 1337-1344, 2016.
42.Ionization of covalent immobilized poly(4-vinylphenol) monolayers measured by ellipsometry, QCM and SPR. Suji Uppalapati, Na Kong, Oscar Norberg, Olof Ramström,∗, Mingdi Yan. Applied Suce Science, vol. 343, p. 166-171, 2015.
43.Pharmacokinetic properties of IgG and various Fc fusion proteins in mice. Felix Unverdorben, Fabian Richter, Meike Hutt, Oliver Seifert et al.. mAbs , vol. 8(1), p. 120-128, 2016.
44.Oriented and reversible immobilization of His-tagged proteins on two- and three-dimensional suces…. Xueming Lia, Siyu Songa, Yuxin Peia, Hai Dongb, , Teodor Aastrupc, Zhichao Peia.. Sensors and Actuators B: Chemical, vol. 224, p. 814-822, 2016.
45.Biomimetic Approach for Ion Channels Based on Suctant Encapsulated Spherical Porous Metal-Oxide Capsules. Eugene Mahon, Somenath Garai, Achim Müller & Mihail Barboiu.. Adv Mater, vol. 27(35), p. 5165-5170, 2015.
46.Targeting Human Cancer by a Glycosaminoglycan binding Malaria protein. Ali Salanti, Thomas M. Clausen, Mette Ø. Agerbæk et al.. Cancer Cell, vol. 28 (4), p. 500–514, 2015.
47.A Fab-Selective Immunoglobulin-Binding Domain from Streptococcal Protein G with Improved Half-Life Extension Properties. Felix Unverdorben, Meike Hutt, Oliver Seifert, Roland E. Kontermann. PLoS ONE, vol. 10(10), 2015.
48.Weighing the suce charge of an ionic liquid. Nicklas Hjalmarsson, Daniel Wallinder, Sergei Glavatskih, Rob Atkin et al.. Nanoscale, vol. 7, p. 16039-16045, 2015.
49.Real time and label free analysis of binding thermodynamics of carbohydrate protein interactions…. Xueming Li1,Siyu Song, Qi Shuai,Yihan Pei, Teodor Aastrup, Yuxin Pei & Zhichao Pei. Scientific Reports 5, article 14066, 2015.
50.Synthesis and binding affinity analysis of positional thiol analogs of mannopyranose for the elucidation of sulfer in different position. Bin Wu, Jiantao Ge, Bo Ren, Zhichao Pei, Hai Dong. Tetrahedron, vol. 71 (23), p. 4023-4030, 2015.
51.Investigating manufactured nanoparticles. Teodor Aastrup et al.. Biotechnology, June 2015
52.Study of the Interaction of Trastuzumab and SKOV3 epithelial cancer cells using a Quartz Crystal Microbalance Sensor. Louise Elmlund, Camilla Käck, Teodor Aastrup & Ian A. Nicholls. Sensors, vol. 15(3), p. 5884-5894, 2015.
53.Preclinical and early clinical development of GNbAC1, a humanized IgG4 monoclonal antibody targeting endogenous retroviral MSRV-Env protein.. François Curtin, Hervé Perron, Arno Kromminga, Hervé Porchet & Alois B Lang. mAbs , vol. 7(1), p. 265-275, 2015.
54.One-Step Synthesis of Dual Clickable Nanospheres via Ultrasonic…. Yong Hou, Shoupeng Cao, Xueming Li, Beibei Wang, Yuxin Pe, Lin Wang, & Zhichao Pei. ACS Appl. Mater. Inteces, 2014, 6 (19), pp 16909–16917
55.3D modeling and characterization of the human CD115 monoclonal antibody H27K15 epitope and design of a chimeric CD115 target. Benoît Grellier, Fabrice Le Pogam, Marc Vitorino et al.. MAbs. 2014 Mar-Apr;6(2):533-46
56.Improved Modeling of In Vivo Kinetics of Slowly Diffusing Radiotracers for Tumor Imaging. Moses Q. Wilks, Scott M. Knowles, Anna M. Wu and Sung-Cheng Huang. J Nucl Med, vol. 55(9), p. 1539-44, 2014.
57.Quantitative ImmunoPET of Prostate Cancer Xenografts with 89Zr- and 124I-Labeled Anti-PSCA A11 Minibody. Scott M. Knowles, Kirstin A. Zettlitz, Richard Tavaré et al.. J Nucl Med, vol. 55(3), p. 452–459, 2014.
58.Highly potent dUTPase inhibition by a bacterial repressor protein reveals a novel mechanism for gene expression control. Judit E. Szabó, Veronika Németh, Veronika Papp-Kádár et al.. Nucleic Acids Res. 2014 Oct 29; 42(19): 11912–11920.
59.Soluble components of the flagellar export apparatus, FliI, FliJ, and FliH, do not deliver flagellin (…) from the cytosol to the export gate. Ráchel Sajó, , Károly Liliom , , Adél Muskotál , Ágnes Klein et al.. Molecular Cell Research, vol. 1843 (11) p. 2414-2423, 2014
60.Mapping the immunogenicity of therapeutic protein products. Samuel Altun, Lena Heffler and Teodor Aastrup. Scientistlive, 30th May 2014.
61.Oligosaccharide G19 inhibits U-87 MG human glioma cells growth in vitro and in vivo by targeting epidermal growth factor (EGF)…. Hailing Liu Ling Zhou, Songshan Shi, Ying Wang,Xinyan Ni et al.. Glycobiology, vol. 24 (8), p. 748–765, 2014.
62.Label free cell based assay for the characterisation of peptide receptor interaction. Davide Proverbio, Jana Valnohova, Shane Wright, Gunnar Schulte and Teodor Aastrup. Clinical Research, vol. 6(2), 2014.
63.Partial-filling affinity capillary electrophoresis and quartz crystal microbalance with adsorption energy distribution calculations…. Lipponen, Tähkä, Samuelsson,Jauhiainen, Metso, Cilpa-Karhu, Fornstedt, Kostiainen, Riekkola. Anal Bioanal Chem. 2014 Jul;406(17):4137-46
64.Hierarchical Thin Film Architectures for Enhanced Sensor Performance: Liquid Crystal-Mediated Electrochemical Synthesis…. Subramanian Suriyanarayanan, Hazrat Nawaz, Natacha Ndizeye, and Ian A. Nicholls. Biosensors 2014, 4(2), 90-110
65.A Phage Display Screening Derived Peptide with Affinity for the Adeninyl Moiety. Elmlund, Söderberg, Suriyanarayanan, Nicholls. Biosensors 2014, 4(2), 137-149
66.Entropy-driven lectin-recognition of multivalent glycovesicles. Zineb Mouline, Eugene Mahon, Emeline Gomez, Veronique Barragan-Montero et al.. Chemical Communications, Issue 6, 2014.
67.Atmospheric pressure plasma polymers fortuned QCM detection of protein adhesion. Rusu, Asandulesa, Topala, Pohoata, Dumitrascu, Barboiu. Biosens Bioelectron. 2014 Mar 15;53:154-9
68.Biotin selective polymer nano-films. Elmlund, Suriyanarayanan, Wiklander, Aastrup, Nicholls. J Nanobiotechnology. 2014 Mar 21;12:8
69.Multivalent Recognition of Concanavalin A by {Mo132} Glyconanocapsules-Toward Biomimetic Hybrid Multilayers. Barboiu, Mouline, Silion, Licsandru, Simionescu, Mahon, Pinteala. Chemistry - A European JournalVolume 20, Issue 22, 2014.
70.Inducement of Cytokine Release by GFPBW2, a Novel Polysaccharide from Fruit Bodies of Grifola frondosa, through Dectin‑1 in Macrophages. Ying Wang, Jianping Fang, Xinyan Ni, Jie Li, Qin Liu, Qun Dong et al.. J Agric Food Chem, vol. 61(47), p. 11400-11409, 2013.
71.Binding to Heparan Sulfate Chains Modulates Cellular Activity by Selectively The C-terminal Peptide of Chondroadherin. Haglund L, Tillgren V, Önnerfjord P & Heinegård D.. J Biol Chem, vol. 288(2), p. 995-1008, 2013.
73.Three complementary techniques for the clarification of temperature effect on low-density lipoprotein–chondroitin-6-sulfate interaction. Cilpa-Karhu, Lipponen, Samuelsson, Öörni, Fornstedt, Riekkola. Anal Biochem. 2013 Dec 15;443(2):139-47
74.A unique anti-CD 115 monoclonal antibody which inhibits osteolysis and skews human monocyte differentiation…. Haegel H, Thioudellet C, Hallet R, Geist M, Menguy T, Le Pogam F et al.. MAbs. 2013 Sep-Oct;5(5):736-47
75.Antagonistic TNF Receptor One-Specific Antibody (ATROSAB): Receptor Binding and In Vitro Bioactivity. Richter, Liebig, Guenzi, Herrmann, Scheurich, Pfizenmaier, Kontermann. Plos One, August 19, 2013.
76.An anti-TNFR1 scFv-HSA fusion protein as selective antagonist of TNF action. Verena Berger, Fabian Richter, Kirstin Zettlitz, Felix Unverdorben et al.. Protein Eng Des Sel. 2013 Oct;26(10):581-7
77.Protection by immunoglobulin dual-affinity retargeting antibodies against dengue virus. Brien, Sukupolvi-Petty, Williams, Lam, Schmid, Johnson, Harris, Diamond. J Virol. 2013 Jul;87(13):7747-53
78.Protein-resistant hyperbranched polyethyleneimine brush suces. Subramanian Suriyanarayanan, Hung-Hsun Lee, Bo Liedberg, Teodor Aastrup, Ian A. Nicholls. J Colloid Intece Sci. 2013 Apr 15;396:307-15
79.A suspension-cell biosensor for real-time determination of binding kinetics of protein–carbohydrate interactions on cancer cell suces. Xueming Li, Yuxin Pei, Ruina Zhang, Qi Shuai, Feng Wang, Teodor Aastrup and Zhichao Pei. Chemical Communications, Issue 85, 2013.
80.Photogenerated lectin sensors produced by thiol-ene/yne photo-click chemistry in aqueous solution. Oscar Norberg, Irene H. Lee, Teodor Aastrup, Mingdi Yan and Olof Ramström. Biosens Bioelectron. 2012 Apr 15;34(1):51-6
81.A novel approach to determining the affinity of protein–carbohydrate interactions employing adherent cancer cells grown on a biosensor suce. Diluka Peiris, Anatoliy Markiv, G. Paul Curley, Miriam V. Dwek. Biosens Bioelectron. 2012 May 15;35(1):160-6
82.Functionalization of single-walled carbon nanotubes and their binding to cancer cells. S.Y. Madani, A. Tan, M. Dwek, A. Seifalian. Int J Nanomedicine. 2012;7:905-14
83.A New Generation of Cell-Biosensors. Miriam Dwek and Teodor Aastrup. The Pharmaceutical Technology Journal.2012
84.Real-time analysis of the carbohydrates on cell suces using a QCM biosensor: a lectin-based approach. Z- Pei, J. Saint-Guirons, C. Käck, B. Ingemarsson, T. Aastrup. Biosens Bioelectron. 2012 May 15;35(1):200-5
85.Domain-based assays of individual antibody concentrations in an oligoclonal combination targeting a single protein. Q. Meng, M. Li, M.A. Silberg, F. Conrad, J. Bettencourt et al.. Analytical Biochemistry, vol. 421(2), p. 351-361, 2012.
86.Half-life extension of a single-chain diabody by fusion to domain B of staphylococcal protein A. Unverdorben, Färber-Schwarz, Richter, Hutt, Kontermann. Protein Engineering, vol. 25(2), p. 81–88, 2012.
87.The effect of adjuvants on the immune response induced by a DBL4ɛ-ID4 VAR2CSA based Plasmodium falciparum vaccine against placental malari. Pinto VV, Salanti A, Joergensen LM, Dahlbäck M, Resende M et al.. Vaccine Volume 30, Issue 3, 11 January 2012, Pages 572-579
88.Structural and Functional Insight into How the Plasmodium falciparum VAR2CSA Protein Mediates Binding…. Thomas M. Clausen, Stig Christoffersen Madeleine Dahlbäck, Annette Eva Langkilde. J Biol Chem. 2012 Jul 6; 287(28):23332-45
89.Plasma half-life extension of small recombinant antibodies by fusion to immunoglobulin-binding domains (IgBD). Meike Hutt, Aline Färber-Schwarz, Felix Unverdorben et al.. J Biol Chem. 2012 Feb 10; 287(7): 4462–4469.
90.Heparin Impairs Angiogenesis through Inhibition of MicroRNA-10b. Xiaokun Shen, Jianping Fang, Xiaofen Lv, Zhicao Pei et al.. J Biol Chem, vol 286(30), p. 26616–26627, 2011.
91.In Vitro Evolution of Allergy Vaccine Candidates, with Maintained Structure, but Reduced B Cell and T Cell Activation Capacity. Ola B. Nilsson, Justus Adedoyin, Claudio Rhyner, Theresa Neimert-Andersson et al.. Plos one, September 13, 2011.
92.Unbinding of hyaluronan accelerates the enzymatic activity of bee hyaluronidase. Iliás, Liliom, Greiderer-Kleinlercher, Reitinger, Lepperdinger. J Biol Chem. 2011 Oct 14; 286(41): 35699–35707.
93.Neonatal FcR Overexpression Boosts Humoral Immune Response in Transgenic Mice. Cervenak, Bender, Schneider, Magna, Valer Carstea, Liliom, Erdei, Bosze and Kacskoics. The Journal of ImmunologyVol. 186, Issue 2, 15 Jan 2011
94.Polyethylene glycol-stabilized lipid disks as model membranes in interaction studies based on electro kinetic capillary chromatography…. K. Vainikka, K. Reijmar, G. Yohannes, J. Samuelsson, K. Edwards et al.. Anal Biochem. 2011 Jul 1;414(1):117-24
95.Collagen I and III and their decorin modified suces studied by atomic force microscopy and the elucidation of their affinity toward.... Witos J, Saint-Guirons J, Meinander K, D'Ulivo L, Riekkola ML. Analyst. 2011 Sep 21;136(18):3777-82
96.Improving the Developability of Biopharmaceuticals. Zurdo J, Michael R, Stallwood Y, Hedman K and Aastrup T. Discovery Technology, 2011.
97.Magnetosome expression of functional camelid antibody fragments (nanobodies) in Magnetospirillum gryphiswaldense. Pollithy, Romer, Lang, Müller, Helma, Leonhardt, Rothbauer, Schüler. Appl Environ Microbiol. 2011 Sep; 77(17): 6165–6171.
98.Towards a Synthetic Avidin Mimic. Wiklander J, Karlsson BCG, Aastrup T, Nicholls IA. Anal. & Bioanal. Chemistry, vol. 400(5), p. 1397–1404, 2011.
99.Three Different Approaches for the Clarification of the Interactions between Lipoproteins and Chondroitin-6-sulfate. K. Lipponen, P.W. Stege, G. Cilpa, J. Samuelsson, T. Fornstedt and M.-L. Riekkola. Anal. Chem., 2011, 83 (15), pp 6040–6046
 

中文名称 Attana Cell 200蛋白互作分析仪
英文名称 Attana Cell 200 biosensor instrument
品牌 Attana
产地 瑞典
货期 现货
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销售区域 中国大陆

 

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