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LONZA Amaxa 4D-Nucleofector细胞核转染系统

在生命科学研究中,将DNA、RNA或蛋白质引入细胞,以改变其基因型或表型的过程被称为转染,在各类研究中十分重要。传统的电穿孔是一种物理转染方法,通过对细胞施加电脉冲,改变细胞膜的通透性,并通过电场将外源分子移动到细胞中。电穿孔技术是细胞系中转染大型DN段的强大工具,但其高细胞毒性、转染原代细胞和干细胞的低效率,限制了其广泛应用。

4D-nucleofector核转染示意图
LONZA 4D-Nucleofector(原Amaxa 4D-Nucleofector)细胞核转染系统,创新性地结合经典电穿孔技术和细胞特异性电转染液,实现了DNA、RNA、小分子物质高效转染各类哺乳动物贴壁细胞和悬浮细胞。

LONZA 4D-Nucleofector技术不依赖于细胞有丝,不受细胞增殖的影响,可直接将外源基因导入细胞核中,即使是未的原代细胞(如静止的T淋巴细胞或神经元),也可以快速表达。

4D-nucleofector核转仪转染GFP质粒快速表达
图. GFP标记的质粒转染新生儿皮肤成纤维细胞,2小时后用3.5% PFA 固定,共聚焦显微镜可观察到GFP蛋白在细胞核内表达。

LONZA Nucleofector对质粒DNA转染效率高达90%,寡核苷酸(如siRNA)转染效率高达99%,面世20年来,已成功转染>1200种细胞系、>130种原代细胞,并在干细胞、免疫细胞、神经细胞等各类较难转染的细胞中获得了优秀的转染效果。

4D-Nucleofector细胞核转染特点
1.针对每种细胞优化的电脉冲参数,可将底物导入细胞质甚至是细胞核;
2.特殊配方的电转染液,同时提供高转染效率和细胞保护,提高细胞转染后存活率;
3.全程实验指导,从细胞来源、传代、培养条件、培养基、到转染后的培养技巧,已形成成熟的实验方案。


4d-nucleofector核转染仪操作实验流程

4D-Nucleofector核转染系统为基因治疗研究、免疫治疗研究、干细胞研究等提供了方便的工具。相比电穿孔在内的其他非病毒转染技术,更具优势:
-采用高分子聚合物电极,避免传统铝电极的离子毒害,维持细胞生理状态,提高存活率。
-转染后可快速观察实验结果,例如转染GFP后最快2小时可观察到蛋白。
-无需自己优化条件,拥有超过650种细胞类型的现成程序,可直接使用,全球共享数据库,超过1500条转染数据可供参考。
-可转染包括DNA、mRNA、miRNA、siRNA、肽、蛋白质在内的多种底物。
-可用于难以转染的原代细胞、干细胞、神经元、细胞系。
-可不用消化细胞,进行贴壁细胞的原位转染。
-灵活的转染规模缩放,可在低、中、高通量中轻松转移,实现2×10^4至1×10^9个细胞数量的轻松扩展。
-已在全球8000多家同行评议的出版物中发表。


最近,LONZA 4D-Nucleofector核转染系统已广泛应用于通过RNAi、CRISPR进行的基因编辑研究、以及iPS诱导多能干细胞、CAR-T的研究中,在包括功能和结构基因组学、药物发现以及基因和细胞疗法的研究中大放异彩。

LONZA 4D-Nucleofector细胞核转染系统参数

品牌 LONZA龙沙
产地 德国科隆
名称 4D-Nucleofector细胞核转染系统
型号 4D
货号 AAF-1002B Core模块,简称C模块
  AAF-1002X X模块
  AAF-1002Y Y模块
  AAF-1002L LV模块
  AAM-1001S 96孔模块
用途 用于干细胞、原代细胞、细胞系的高效转染
适用细胞 贴壁细胞、悬浮细胞,包括难转染的血液系统细胞和干细胞
转染物 质粒、RNA、蛋白质、小分子化合物等


4D-Nucleofector细胞核转染系统采用模块化设计,可根据研究者的需求,自行组合数个模块形成一套完整系统。

常用模块组合参考:
常规小规模转染:C+X
贴壁细胞原位转染:C+Y
悬浮+贴壁细胞转染:C+X+Y
大规模转染:C+X+LV
摸索复杂转染条件:C+X+96孔

4D-nucleofector核转仪功能模块一览

各模块功能和应用:
1、C模块:4D-Nucleofector系统的控制单元,内置转染程序,将不同的功能单元(模块)整合为一个系统,以运行不同的应用程序。

C模块

2、X模块:用于悬浮细胞、或贴壁细胞消化后的小规模转染,转染细胞数量2×10^4至2×10^7。可同时转染2个100μL电转杯、1个16孔电转板条(每孔20μL),每个电转杯、每个孔可独立设置程序。另外在使用96孔模块时,也需要X模块。

X模块

3、Y模块:用于贴壁细胞不经消化的原位转染,可同时转染1个24孔电转板条(每孔350μL),每个孔可独立设置程序。

Y模块

4、LV模块:用于同一种悬浮细胞、或同一种贴壁细胞消化后的大规模转染,转染细胞数量1×10^7至1×10^9。可使用1mL手动进样电转盘、或20mL连续进样电转盘。通常使用X模块小试摸条件,再用LV模块线性放大转染规模。

LV模块

5、96孔模块:用于同时转染96个样品的细胞,转染细胞数量2×10^4至1×10^6。每个孔可独立设置程序。必须与X模块结合使用。

96孔模块

 

参考文献:
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