NEB限制性内切酶
——HF高保真酶、省时酶、Golden Gate 无缝克隆IIS内切酶

 
北京泽平代理美国进口NEB公司（New England Biolabs）限制性内切酶、缓冲液buffer、试剂盒等，提供业内更丰富的300种限制性内切酶，涵盖EcoRI、XbaI、BamHI 等II型限制性内切酶，以及BsaI-HFv2、BsmBI-v2 等IIS型限制性内切酶，并提供36种HF高保真限制性内切酶、180种省时限制性内切酶（省时酶，同时支持5min快切、过夜酶切）、210种使用通用buffer的限制性内切酶（方便双酶切）、以及GMP级别产品，大量用于生物实验的传统克隆、无缝克隆、甲基化分析、定点突变等应用，具备高活性、高批次间一致性，满足生命科学实验室基础研究、生物制药企业的广泛需求。

美国NEB公司自1975年起研发生产商品化的限制性内切酶，距今已有50年的历史，产品以高性能、高稳定性著称。NEB内切酶基本都采用基因工程重组法生产，重组内切酶活性高、纯度高、无其他酶污染，其高保真内切酶、省时酶等产品获得广大用户认可。



 
1、NEB HF高保真限制性内切酶

①低星号活性——通过基因工程改造，避免非特异性切割，具备更低的星号活性，酶切反应条件更加灵活；

②省时内切酶——高保真酶同时作为省时酶，支持5~15min快速酶切DNA，或过夜酶切，而不产生星号活性或DNA降解；

③方便双酶切——所有高保真内切酶在NEB rCutSmart通用缓冲液buffer中均保持100%酶切活性，方便双酶切操作；

④高纯度高一致性——严格质控，高纯度，消除核酸酶污染，酶切末端完整不被降解，具备高批次间一致性，高重现性；

⑤送上样染料——随高保真酶赠送6×紫色凝胶上样染料，消除电泳时染料的紫外阴影，含有SDS避免内切酶和DNA结合产生超大条带，改善电泳分析。

建议优先选择高保真内切酶，如没有合适位点，可选择NEB省时酶。



图. 在高浓度条件，NEB EcoRl-HF 过夜酶切也不会产生星号活性。50μL反应体系中加入1μg Lambda DNA、图示不同浓度的酶以及相应的反应缓冲液，在37℃下过夜酶切。M为1kb DNA Ladder。

 

 
2、NEB省时酶

酶切时长灵活——提供超过180种省时限制性内切酶，支持5~15min快速酶切DNA，或过夜酶切，而不产生星号活性或DNA降解。



图. NEB Hindll-HF 能够在5分钟内完全酶切1μg DNA，也可用于过夜酶切，而不发生非特异性酶切或降解。M为1kb DNA Ladder。

 

 
3、共用rCutSmart缓冲液的内切酶

①方便双酶切——提供超过210种统一使用NEB rCutSmart 缓冲液的限制性内切酶，其在rCutSmart buffer 中具有100%活性，方便双酶切操作；

②简化实验流程——多种DNA修饰酶在rCutSmart缓冲液中具有100%活性，限制性内切酶处理后无需纯化样本，方便继续克隆，简化实验流程；

③减少酶吸附——rCutSmart buffer 包含重组蛋白，可防止内切酶粘附在反应管和移液吸头表面。

④送上样染料——大部分内切酶赠送6×紫色凝胶上样染料，消除电泳时染料的紫外阴影，含有SDS避免内切酶和DNA结合产生超大条带，改善电泳分析。



 

 
4、NEB无缝克隆用NEBridge Golden Gate 组装IIS型内切酶

提供业内更丰富的50种IIS型限制性内切酶，其中9种经Golden Gate 组装（金门组装）验证，可用于≤52个DNA片段的无缝克隆。

①高组装效率——支持单管完成≤52个片段的复杂片段组装，具备非常高的组装效率，其中≤30个片段的组装效果更佳；

②兼容性强——支持高GC含量、高重复序列、＜100bp片段、＞15kb片段的组装；

③使用灵活——提供NEBridge Golden Gate 组装试剂盒、9种经Golden Gate 组装验证的IIS型限制性内切酶、连接酶预混液（添加连接增强剂）、T4连接酶等丰富产品形式，供实验人员灵活选择。

④设计工具——提供GoldenGate.neb.com 在线设计软件，可以方便、快捷地进行Golden Gate 组装引物设计。



以IIS型限制性内切酶BsaI-HFv2为例，进行Golden Gate 组装时，需要在dsDNA片段的两端加上其识别位点（GGTCTC）。酶切后，识别位点被移除，组装片段末端带有设计好的特定4碱基突出以指导组装。



对于包含12、24、35、52个片段的Golden Gate 组装反应，显示了含有正确组装的菌落百分比。误差线为至少3个重复的标准差。以下几篇文献对此进行了报道：

1. Pryor, J.M., et al. (2022) ACS Synth. Biol. e0525
2. Pryor, J. M. et al. (2020). PLoS One, e8592
3. Potapov, V. et al. (2018). ACS Synth. Biol., e0333 

 
 

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