IDT Alt-R CRISPR-Cas12a（Cpf1）基因编辑系统

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IDT Alt-R® CRISPR-Cas12a(Cpf1)基因编辑系统

当物种基因组富含A、T、DNA靶点无法使用Alt-R® CRISPR-Cas9基因编辑时，IDT提供的Alt-R® CRISPR-CAS12a系统可作为替代，使用时只需将crRNA与Cas12a蛋白简单混合即可形成RNP，而无需tracrRNA，IDT CRISPR-Cas12系统对CRISPR的使用范围进行了补充。

Alt-R® CRISPR-Cas12a实验流程

1、设计crRNA，使其Spacer与DNA靶序列互补，提交给IDT定制合成crRNA；
2、将crRNA与Cas12a蛋白混匀，形成RNP；
3、将RNP通过电转染等导入细胞或细胞核；
4、通过crRNA的Spacer识别DNA靶序列，通过Cas12a蛋白识别PAM序列，对DNA进行剪切；
5、对DNA断裂处进行修复
①进行非同源末端连接修复，实现基因敲除；
②（用IDT工具）设计供体DNA模板，进行同源重组修复，实现基因敲入、敲除、沉默等。

Alt-R® crRNA序列设计示意图

IDT CRISPR-Cas12a（Cpf1）产品

1、crRNA：定制合成的crRNA，包含20-24nt的特异性序列（定制）和20nt的通用序列，经化学修饰，具有核酸酶抗性。需要与Cas12a结合形成RNP复合体。

类型	产品名称	规格	包装
类型	产品名称	规格	管	96孔板	384孔板
crRNA	Alt-R® A.s. Cas12a crRNA	2 nmol	√	√	√
	Alt-R® A.s. Cas12a crRNA	10 nmol	√	√	√
	Alt-R® L.b. Cas12a crRNA	2 nmol	√	√	√
	Alt-R® L.b. Cas12a crRNA	10 nmol	√	√	√

2、Cas12a核酸酶：包含核定位信号NLS，其中Alt-R® Cas12a Ultra核酸酶增强了对TTTT的PAM识别。

类型	产品名称	规格	货号
Cas12a (Cpf1) 核酸酶	Alt-R® A.s. Cas12a (Cpf1) Ultra	100 μg	10001272
	Alt-R® A.s. Cas12a (Cpf1) Ultra	500 μg	10001273
	Alt-R® A.s. Cas12a (Cpf1) V3	100 μg	1081068
	Alt-R® A.s. Cas12a (Cpf1) V3	500 μg	1081069

3、Cas12a电转Enhancer：是Cas12a特异性的载体DNA，当使用原代细胞或难转染细胞时，可提高Lonza(原Amaxa）Nucleofector核转染系统等电穿孔设备的对RNP的转染效率，进而提高实验效率。

类型	产品名称	规格	货号
电穿孔Enhancer	Alt-R® Cpf1 Electroporation Enhancer	2 nmol	1076300
电穿孔Enhancer	Alt-R® Cpf1 Electroporation Enhancer	10 nmol	1076301

4、Alt-R® HDR Enhancer：小分子化合物，可提高同源重组修复概率。在包括贴壁、悬浮的大量细胞系中均有活性，可用于Cas12a（Cpf1）核酸酶、Cas9核酸酶。

类型	产品名称	规格	货号
HDR Enhancer	Alt-R® HDR Enhancer	100 µL	1081072
HDR Enhancer	Alt-R® HDR Enhancer	500 µL	1081073

5、Alt-R® HDR供体寡核苷酸：专门为同源重组修复基因敲入开发，具有比标准寡核苷酸更高的稳定性和更高的掺入率。

Cas12a和Cas9系统区别和应用

IDT Alt-R® CRISPR		Alt-R® CRISPR-Cas12a（Cpf1）系统		Alt-R® CRISPR-Cas9系统
		Alt-R® Cas12a V3核酸酶	Alt-R® Cas12a Ultra核酸酶	Alt-R® Cas9核酸酶	Alt-R® Cas9切口酶
特点		通用Cas12a酶，富含AT的物种，或使用CRISPR-Cas9有限制	经序列优化的Cas12a酶，比Cas12a通用型性能更佳	通用Cas9酶，易于使用且经济实惠	突变的Cas9酶，保留单链切割能力
PAM识别		TTTV	TTTN	NGG
DNA切割		双链		双链	单链
末端		5’突出		平末端	5’突出/3‘突出
建议用途		无法使用Cas9的基因编辑实验	需要高基因编辑效率的实验	一般基因编辑实验	适用于同时使用2种crRNA，各自识别并切割2条链中一条，通过将spacer由20nt提高到40nt，实现更高特异性
规格		100 μg或500 μg
Cas12a+crRNA	crRNA	20-24nt特异性序列（推荐使用21nt），20nt通用序列		\
Cas9+gRNA	crRNA	\		19-20nt特异性序列（推荐使用20nt），16nt通用序列
	tracrRNA	\		67nt通用序列
Cas9+sgRNA	sgRNA	\		19-20nt特异性序列（推荐使用20nt），80nt通用序列，经过序列修饰，不会引起细胞免疫反应，不会激活无关的基因

注：
N=任意碱基
V=A、C、G

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